Анализ пцр гепатит с не обнаружено

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Что такое метод полимеразной цепной реакции?

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Разновидности исследования ПЦР

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Показания к проведению

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

• Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
• Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
• Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
• Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
• Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
• При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
• Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
• Для контроля результативности проводимой терапии.
• После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Подготовка к проведению исследования и забор материала

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

• Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
• Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
• В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
• После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
• К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

Преимущества ПЦР перед другими анализами

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Прямая диагностика возбудителя патологии	Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента.
Специфичность исследования	ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки.
Высокая степень чувствительности	Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови.
Определение всех возбудителей	Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов.
Скрыто протекающие инфекции	Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью.

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровка результатов

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественный

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Количественный

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат	Расшифровка
Отрицательно	Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости.
До 1,8*10^2 МЕ/мл	Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест.
До 8*10^5 МЕ/мл	Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно.
От 8*10^5 МЕ/мл	Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений.
2,4*10^7 МЕ/мл	РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости.

Генотипирование

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Когда ПЦР отрицательно, а ИФА положительно

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Стоимость исследования на гепатит С

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Название лабораторной службы	Ценовая политика
Хеликс	· Стоимость забора биологического материала – 170 рублей.

· Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей.

· Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня).

· Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей.

Инвитро · Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей.

· Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей.

· Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей.

· Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей.

· Проведение генотипирования – от 1250 рублей.

Гемотест · Цена количественного исследования 2200 рублей.

· Качественная диагностика от 700 рублей.

· Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей.

· Забор крови из вены около 150 рублей.

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

Анализ ПЦР на гепатит С представляет собой внутривенный забор крови с целью определения в ней вируса РНК гепатита на генетическом уровне. Своё название анализ получил исходя из метода исследования.

ПЦР — это полимеразная цепная реакция, с помощью которой в сыворотке крови определяют наличие гепатита С. Итог может быть положительным и отрицательным.

Достоинства метода ПЦР

Этот метод диагностики обладает следующими достоинствами:

1. Метод ПЦР позволяет определить следующие результаты:
2. наличие вируса РНК;
3. степень радиоактивного излучения;
4. первоначальную генетическую информацию;
5. уникальность и неповторимость генетических данных.
6. Можно использовать любой необходимый клинический материал:
7. кровь;
8. плазма;
9. моча;
10. биологические жидкости и выделения;
11. мокрота и другие.
12. Позволяет определить в крови более одного микроорганизма одномоментно, в отличие от других проб.
13. Получение результата в течение суток.
14. Упрощённые методы хранения и транспортировки анализа, возбудители определяются даже в мёртвой среде.
15. Уникальность ПЦР позволяет выявлять определённые микроорганизмы, которые не поддаются ни одной другой пробе.
16. Высокая степень чувствительности реактивов, тест является самым точным в своём роде.

Особенности качественного анализа ПЦР

Качественный тест проводится с целью определения наличия вируса в крови и получения отрицательного или положительного итога.

Показанием к проведению этого вида диагностики является выявление в организме пациента антител к гепатиту С.

Возможные итоги:

• обнаружено (положительный);
• не обнаружено (отрицательный).

Качественный тест не подходит пациентам с очень низким содержанием вируса в крови, так имеет определённую чувствительность.

Обнаружить вирус гепатита С можно уже через несколько недель после инфицирования организма, даже при отсутствии антител к этому возбудителю. Такой результат свидетельствует о наличии в организме и кровипациента фрагмента РНК, характерного для гепатита С.

Пациент считается инфицированным данным вирусом и подвергается дальнейшему распространению патогенных клеток в организме.

Результат «не обнаружено»

Такой вариант говорит о том, что в исследуемом образце биологического материала отсутствуют фрагментыРНК специфичные для гепатита С. Это отрицательный результат.

Чувствительность теста не позволяет выявить низкое содержание фрагментов РНК, поэтому итог «не обнаружено» не всегда является правдоподобным.

Особенности интерпретации результатов

Главной особенностью интерпретации результатов является порог чувствительности метода ПЦР.

Он зависит от следующих показателей:

• точность проведения исследования;
• вид и качество используемой аппаратуры.

Отмечено, что чувствительность может колебаться в пределах 10-500 МЕ/мл. Из этого следует, что если в организме исследуемого пациента присутствует вирус в концентрации меньше 10 МЕ/мл тест покажетрезультат «не обнаружено». Но это вовсе не означает, что возбудитель полностью отсутствует.

Варианты диагностических систем

На данный момент выделяют следующие варианты систем диагностики:

1. Если забор крови проводится у пациента, находящегося на противовирусном лечении, то должны быть использованы системы диагностики чувствительностью не меньше 50 МЕ/мл. Для этой цели применяют следующие анализаторы:
2. Cobas Ampicolor ВГС-Теst;
3. РеалБест РНК ВГС.
4. Чтобы поставить окончательный диагноз «гепатит С» необходимо обнаружить РНК вирус в трёх разных заборах биологического материала. Эти рекомендации разработаны Всемирной Организацией Здравоохранения. Эсли итог трехкратно отрицательный, то диагноз не подтверждается.
5. На данный момент помимо метода ПЦР существует более точный тест, именуемый ТМА (транскрипционный метод амплификации). Его порог чувствительности гораздо выше, чем в других методикахдиагностики.

Диапазон выявляемых модификаций вирусов

На данном этапе развитии генетики известно несколько видов и вариантов модификации вирусов.

Лабораторная диагностика в нашей стране со стопроцентной точностью может определить следующие генотипы:

Особенности количественного анализа ПЦР

Количественный анализ представляет собой определение вируса гепатита С в организме человека. Во время исследования с помощью ПЦР определяют РНК и вирусную нагрузку в исходном материале. Иначе, можно сказать, что тест позволяет выявить какое количество вирусных клеток находится в биологической жидкости. Для этого вида исследования используется только венозная кровь. Специфической подготовки к тесту нет.

Количественный анализ позволяет вести контроль на уже начавшемся этапе лечения и оценивать его эффективность. Для оценки берут данные теста до начала и во время терапевтических мероприятий. С помощью полученных результатов можно прогнозировать течение болезни.

При успешности выбранного метода лечения через 3 месяца количество РНК должно уменьшиться в несколько раз. Согласно рекомендациям количественный анализ проводят через один, затем через три и шесть месяцев. Последний результат при успешности лечения должен быть отрицательным.

Оценка результатов количественного теста ПЦР

В нашей стране существует 2 возможных варианта оценки результата количественного теста ПЦР:

• количество копий на миллилитр биологической жидкости;
• количество международных единиц на миллилитр.

Чтобы получить международные единицы количество копий делят на 4.

Выделяют 2 уровня нагрузки или виремии:

• высокая с показателем ПЦР выше 800000 МЕ/мл;
• низкая с показателем ПЦР ниже 400000 МЕ/мл.

Результат количественного теста предусматривает 2 варианта:

• «ниже диапазона измерений»;
• «не обнаружено» (отрицательный).

Оценка: «ниже диапазона измерений»

Такое заключение ставится когда количественный тест РНК не обнаружил в исходном материале клетки возбудителя гепатита С. Но вирус всё равно присутствует в крови. Достоверность анализа подтверждаетсякачественным способом, так как порог чувствительности количественного теста может не обнаружить маленькие значения и концентрации возбудителя.

Оценка: «не обнаружено»

Такое заключение ставиться когда в исходном материале во время диагностики не были обнаружены РНКвирусы гепатита С. Это отрицательный результат.

Интерпретация результатов анализа количественного теста ПЦР

С помощью показателя вирусной нагрузки определяют:

• степень запущенности болезни;
• насколько заразен больной;
• эффективность противовирусной терапии.

Чем выше показатели вируса гепатита С в организме, тем опаснее пациент для окружающих людей и тем прогрессивнее его заболевание.

ПЦР на гепатит С является важным методом диагностики, особенно в процессе терапевтических мероприятий. Благодаря полученным отрицательным или положительным итогам можно оценить их эффективность, полностью излечить больного или сократить сроки лечения.

Автор: Петрунина Светлана Сергеевна,
медсестра палаты интенсивной терапии,
специализация-острые отравления, реанимация,
специально для сайта moizhivot.ru

Полезное видео о полимеразной цепной реакции

Гастроэнтерологи в вашем городе

Выберите город:

Качественный анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР на гепатит С определяет наличие или отсутствие ВГС в организме. В лабораторных условиях исследуется структура РНК, в составе которой и будет находиться вирус. В случае выявления вируса С необходимо пройти курс лечения, так как запущенное состояние печени в результате приведет к тяжелым последствиям. Качественный ПЦР проводится и после выздоровления для подтверждения отсутствия антител. Назначается и для профилактического осмотра. При низкой концентрации возбудителя в крови ПЦР (качественный) может ничего не обнаружить, ведь у диагностической системы есть свои пороги чувствительности. В случае начальной стадии болезни или легкой форме проводят ПЦР ультра диагностику на сверхчувствительном оборудовании.

Что такое РНК вирус?

Термином РНК вируса гепатита С (или вирус гепатита С РНК) называется само заболевание печени. Вирус С связывается со здоровой клеткой организма, проникая внутрь. Со временем разносится по всему организму, стоит только ему попасть в кровь. В итоге возбудитель проникает в печень, сращивается с ее клетками и усиленно работает. Печеночные клетки (гепатоциты) работают под его воздействием, претерпевая изменения, и от этого гибнут. Чем дольше вирус С находится в печени, тем большее количество клеток гибнет. Со временем развиваются опасные болезни, приводящие к злокачественному перерождению и летальному исходу.

Заражение печени этой разновидностью вируса может никак не проявляться внешне. Долгие годы или десятки лет зараженный человек чувствует себя абсолютно здоровым, и только случайное обследование чаще всего и выявляет патологию. При сдаче крови на гепатит исследуется часть цепочки РНК (рибонуклеиновой кислоты), входящей в состав человеческого гена (ДНК). Результаты лабораторного исследования не стоит использовать для самолечения, ведь это только показатель. Точную картину и дальнейшую диагностику лучше определит врач.

Когда делается: показания к исследованию

В подтверждение ВГС назначается анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция). Исследования ПЦР помогают найти материал возбудителя в структуре РНК и назначить эффективную терапию. Назначается в следующих случаях:

• выявление признаков воспаления печени;
• скрининговые исследования с целью профилактики;
• обследование контактирующих людей;
• диагностирование гепатитов смешанного происхождения (определение главного возбудителя);
• определение уровня активности размножения вируса при хронической форме;
• цирроз печени;
• для определения эффективности назначенного лечения.

Исследования ПЦР назначает врач для определения эффективности курса лечения гепатита.

Существует качественный, а также количественный анализ ПЦР. Количественный ПЦР показывает процентное соотношение РНК с носителями вируса в крови, а качественный указывает на вирусное присутствие либо отсутствие. Положительный показатель качества (присутствия РНК гепатита С) нуждается и в количественном исследовании. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита С сопряжена с риском его передачи, то есть заражения окружающих. Низкие показатели количества лучше поддаются лечению. Количество РНК-вирусов в составе крови никак не связано с интенсивностью заболевания. Делается анализ ПЦР и в случае интерфероновой терапии, чтобы назначить продолжительность и сложность лечебного курса.

Особенности качественного ПЦР анализ на гепатит С

Назначается качественный анализ с показателем полимеразной цепной реакции всем пациентам, у кого в крови обнаружены антитела к гепатиту С. Кто переболел и выздоровел, должен повторно пройти тестирование. Рекомендуется сдать анализ и на гепатит В, затем, в случае положительного заключения, и на гепатит D. Также качественно анализированная реакация должна проводиться в комплексе с другими анализами крови. Анализы покажут полную картину вирусного распространения.

Из результатов теста будет виден только положительный анализ на гепатит С или же отрицательный, то есть наличие или отсутствия вируса. Если в выводе стоит «обнаружено», значит, вирус есть и продолжает активно действовать. Обозначение «не обнаружено» говорит об отсутствии вируса или его маленьком количестве. При таком показателе следует учитывать то, что аналитическая чувствительность диагностических систем разная и РНК гепатит С все же может находиться в крови, но не проявиться в анализе.

Особо чувствительный метод ПЦР ультра гепатит С выявляет даже в мизерных количествах. Используется гибридизационно-флуоресцентное исследование, которое во много раз выше, чем стандартные системы ПЦР. Метод применяют в нескольких случаях:

• подозреваются скрытые формы гепатита С;
• диагностика ПЦР не подтвердила возбудитель, но антитела есть;
• в случае выздоровления;
• для выявления ранней стадии заражения.

Расшифровка анализа

Определение РНК вируса гепатита С методом полимеразно-цепной реакции.

На окончательное решение при постановке диагноза влияет ПЦР расшифровка ВГС, в частности, при ультраметоде. Основной недостаток такого исследования — строгое соблюдение стерильных условий для образца и материалов. Небольшое отклонение иногда показывает неточные выводы аналитики, усложнит постановку диагноза и последующее лечение. Анализ ПЦР на определение РНК вируса гепатита не всегда уверенно показывает картину заболевания, иногда допускаются неточности, причем в обе стороны.

Диагностируя вирус гепатита, рекомендуется применять комплексное обследование.

Норма показателей

Отсутствие в результатах исследования антител JgM к РНК вирусному гепатиту С считается нормой при анализе полимеразной цепной реакции. В то же время выводы серологического анализа указывают на присутствие антител к вирусу С и это также в пределах нормы. Качественное определение не показывает интенсивность заболевания, оно только выявляет возбудитель гепатита С в РНК. Такой анализ повторяют и после лечения, чтобы подтвердить действительное выздоровление.

Отклонения

Если антитела JgM к РНК ВГС присутствуют, это говорит о развивающемся заражении. Заболевание при этом протекает остро или хронически, проявляется в разных стадиях. Если зафиксировано уменьшение количества антител, то анализ будет свидетельствовать о достижении результатов лечения в ходе выздоровления. Встречаются в диагностике исключительно редкие случаи ложноположительных выводов. Они обнаруживаются у женщин при беременности и у людей с другими инфекционными болезнями.

Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Что показывает этот анализ и зачем он нужен?

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

• высокая чувствительность – 97-98%;
• гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
• быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Три вида ПЦР анализов

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

• в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
• часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
• вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

• исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
• разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
• накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
• за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
• до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Результат анализа ПЦР на гепатит С

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.